炭疽杆菌噬菌体裂解酶基因在大肠杆菌中的表达及鉴定

作者：李晓静; 张豪; 付学奇; 李彦英; 陈璟; 李玉玲; 方宏清; 陈惠鹏

来源：生物工程学报, 2005, 21(2): 216-219.

DOI：10.3321/j.issn:1000-3061.2005.02.009

• 噬菌体裂解酶
• 炭疽杆菌
• 大肠杆菌

利用PCR方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶(γlysin)基因,克隆至大肠杆菌表达载体pET22b中,经菌落PCR筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET22b-γlysin构建成功,并在Escherichia coli BL21(DE3)中获得了高表达.目的蛋白约占菌体总蛋白的40%,5L发酵罐中的产酶水平高达15g/L.菌体经超声破碎,制备无细胞抽提液,Streamline SP和SP HP柱层析以及Sephcryl S-100凝胶过滤三步纯化,得到分子量为27kD单一条带的目的蛋白,薄层扫描分析显示其纯度大于95%.目的蛋白的收率为19.1%,纯化倍数为350.生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性:可快速裂解炭疽杆菌,比活为1400u/mg左右;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性.

• 单位
  军事医学科学院; 吉林大学; 生命科学学院