纤维连接蛋白C端肝素结合域多肽在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定

作者：陈小芳; 陈显凌; 邹起练; 吴勇; 陈元仲

来源：生物工程学报, 2012, (10): 1265-1273.

DOI：10.13345/j.cjb.2012.10.009

• 纤维连接蛋白
• 肝素结合域
• 毕赤酵母
• 表达纯化 fibronectin
• heparin-binding domain
• Pichia pastoris
• expression and purification

为在毕赤酵母中表达纤维连接蛋白C端肝素结合域(Fibronectin C-terminal heparin-binding domainFNCHBD)多肽并研究其功能,通过PCR技术扩增FNCHBD目的基因,将目的基因与T载体连接,经测序正确后,插入pAo815SM酵母表达载体增加基因拷贝数,然后酶切克隆入酵母表达载pPIC9K;将重组质粒Sal I酶切线性化后转化毕赤酵母菌株,筛选工程菌,经甲醇诱导表达,用SDS-PAGE检测发酵上清液,表明有重组蛋白FNCHBD多肽的高表达,表达产物通过离心、超滤、离子交换层析纯化,纯化产物通过SDS-PAGE、Western blotting印迹、质谱及...

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 福建医科大学