蓝舌病病毒VP7蛋白的可溶性纯化及多克隆抗体的制备

作者：丁晓攀; 车永军; 郭艳妮; 高闪电; 田占成; ALI MOHAMED Darien Kheder; 关贵全; 孙世琪; 殷宏^*; 独军政^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(09): 1128-1133.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0111

• 蓝舌病病毒
• VP7基因
• 可溶性表达
• 纯化
• 多克隆抗体

首先参照GenBank中已发表的基因序列人工合成蓝舌病病毒VP7基因,将其克隆到表达载体pSMK上。选取含有正确开放阅读框的重组质粒pSMK-VP7,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,于16℃利用IPTG诱导剂进行诱导表达,优化表达条件,纯化重组VP7蛋白,免疫新西兰白兔制备VP7多克隆抗体,利用免疫印迹试验对制备的多克隆抗体进行特异性分析。结果显示,重组VP7蛋白在大肠杆菌中呈可溶性表达,且16 h表达量最大,利用镍离子树脂纯化获得了高纯度的VP7蛋白;原核表达的重组VP7以及天然的VP7蛋白均能够与VP7多克隆抗体发生特异性反应。本研究成功实现了重组BTV VP7蛋白的可溶性表达和纯化,并制备了特异性良好的多克隆抗体,为进一步开展BTV的VP7功能研究和建立BTV诊断方法奠定了基础。

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心