对虾肝胰腺细小病毒衣壳蛋白的原核表达和抗血清制备

作者：高金艳; 宋静静; 龚斌^*; 方怀义; 张虹; 曹宏明

来源：基因组学与应用生物学, 2021, Z2: 2721-2727.

DOI：10.13417/j.gab.040.002721

• 对虾肝胰腺细小病毒
• 衣壳蛋白
• 多克隆抗体
• 原核表达

对虾肝胰腺细小病毒(hepatopancreatic parvovirus, HPV)是对虾的重要病原之一。本研究的目的是在大肠杆菌中表达全长的HPV病毒衣壳蛋白(CP)，制备针对CP蛋白的多克隆抗体。本研究根据中国对虾(Penaees chinensis) HPV病毒(韩国株)的基因序列，人工合成衣壳蛋白全长cp基因，并亚克隆到pSUMO载体，转化到Rossetta (DE3)菌株诱导表达，获得纯化的SUMO-CP融合蛋白后，经免疫兔获得多克隆抗体，通过SUMO蛋白与琼脂糖介质偶联制备成抗原亲和纯化层析柱，去除非特异性抗体成分，并进一步通过ELISA和Western Blotting对血清效价和特异性进行测定。结果表明成功构建了pSUMO-sHPVCP重组质粒，SUMO-CP融合蛋白在大肠杆菌中是以包涵体形式存在的，WB检测大小正确。Ni柱纯化后蛋白纯度可以达到90%以上，本研究制备了10 mg的SUMO-CP融合蛋白用于多抗制备。经过SUMO蛋白亲和柱去除抗SUMO的交叉反应抗体后，抗CP蛋白抗血清的特异性增强，多抗得率达到5.4 mg以上，抗血清中抗CP蛋白的抗血清滴度为512 000以上，经过WB检测后表明抗体的特异性好。本研究为进一步开展对虾HPV病毒致病机理、免疫制剂及诊断试剂的研究奠定了基础。

• 单位
  广西大学; 北部湾大学