基于适配体-杂交链式反应比色检测生鲜牛乳中四环素类抗生素

作者：刘长勇; 卢春霞^*; 兰国伟; 王娟; 唐宗贵; 陈霞

来源：理化检验. B, 化学分册, 2023, 1-7.

• 四环素类抗生素
• 核酸适配体
• 杂交链式反应
• 比色检测

以特异性识别四环素类抗生素（TCs）的广谱型适配体为识别元件，结合杂交链式反应（HCR）信号放大策略，提出了一种四环素类抗生素多残留比色检测方法，并优化了检测条件和进行了方法学考察。取40nmol/L 生物素化检测探针（bio-DP）溶液加入到包被有亲和素的酶标板，室温孵育后加入牛血清白蛋白（BSA）溶液，封闭反应1 h。加入牛乳样品稀释液，室温孵育20 min，如果样品中含有TCs，TCs与bio-DP的适配体序列结合，其发夹结构会被打开。加入200nmol/L生物素化发夹DNA1（bio-H1）溶液和200nmol/L生物素化发夹DNA2（bio-H2）溶液，室温下进行HCR 40 min，从而形成具有多个重复单元的双链DNA（dsDNA）纳米线。加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素（SA-HRP），室温孵育标记dsDNA。加入显色剂3，3’，5，5’-四甲基联苯胺（TMB），HRP催化TMB生成蓝色反应生物，显色5～8 min后终止反应，在酶标仪中于450 nm测量上述体系的吸光度。结果显示，bio-DP对四环素、土霉素、金霉素和多西环素具有高特异性，和卡那霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、泰乐菌素、磺胺嘧啶和恩诺沙星等抗生素无交叉反应。四环素、土霉素、金霉素和多西环素的质量浓度总和在0.8～100 μg/L内与对应的吸光度呈线性关系，检出限（3s/k）为0.18 μg/L 。对牛乳样品进行加标回收试验，TCs回收率为82.6%～114%，测定值的相对标准偏差（n=3）为2.5%～7.1%。方法应用于生鲜牛乳样品的分析，检测结果与国家标准方法GB 31658.6-2021差异不显著（P>0.05），检出的总TCs也均未超标。与文献报道的其他方法相比，上述方法兼具简单、快速、检出限低、准确度高等优点，适用于食品中四环素类抗生素多残留的快速检测。

• 单位
  长江师范学院; 石河子大学; 新疆农垦科学院; 生物工程学院; 化学化工学院