利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因的表达载体

作者：张帆; 宗渊; 马伟; 徐登; 武建英^*

来源：兰州大学学报(医学版), 2020, 46(01): 72-76.

DOI：10.13885/j.issn.1000-2812.2020.01.014

• Crispr/Cas9
• 先天性心脏病
• 关键基因
• 表达载体

目的利用Crispr/Cas9技术构建影响先天性心脏病关键基因表达载体,为后续基因编辑工作做好前期分子实验基础。方法利用NCBI数据库检索调控先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5,通过生物软件在线设计3个基因对应的sgRNA。对慢性病毒载体lentiCRISPRv2进行BsmB I单酶切,通过胶回收获得线性化载体。利用T4连接酶将处理后的双链sgRNA和载体连接,通过大肠杆菌转化、质粒提取和测序最终得到lentiCRISPRv2-NKX2-5、lentiCRISPRv2-GATA4、lentiCRISPRv2-TBX5 3种病毒表达载体。结果获得评分最高且碱基数量合适的sgRNA,通过对表达载体的线性化酶切,成功去除载体中2 000 bp左右的置换片段,对连接后的载体测序显示双链sgRNA与病毒表达载体置换片段序列一致。结论利用Crispr/Cas9可成功构建先天性心脏病关键基因NKX2-5、GATA4、TBX5病毒表达载体。

• 单位
  青海大学; 青海大学附属医院