SLC25A5基因真核表达载体的构建及其功能验证

作者：亢小峰; 霍楠; 丛瑞; 马路园; 初众; 唐枝; 孙志佳; 贾松浩; 刘含笑; 徐小洁; 张萍^*

来源：军事医学, 2020, 44(12): 926-946.

• SLC25A5基因
• 癌,肝细胞
• HepG2
• 真核表达
• 细胞增殖

目的构建SLC25A5基因的真核表达载体,同时验证该基因与肝癌细胞生长之间的关系。方法以人乳腺文库为模板,采用PCR技术扩增出SLC25A5的CDS区编码序列,应用双酶切将PCR产物插入到带Flag标签的pCMV-Tag2B载体上,酶切和测序验证后转染到人肝癌HepG2细胞中,通过Western印迹检测其表达情况,CCK-8法、克隆形成实验测定其对肝癌HepG2细胞生长的影响。结果双酶切结果显示,pCMV-Tag2B-Flag-SLC25A5真核表达载体构建成功;提取质粒转染人肝癌HepG2细胞;Western印迹技术验证该基因蛋白成功表达;CCK-8法和克隆形成实验证明过表达pCMV-Tag2B-Flag-SLC25A5促进肝癌HepG2细胞增殖。结论 pCMV-Tag2B-Flag-SLC25A5真核表达载体构建成功,并证明其可促进肝癌细胞增殖,为进一步研究SLC25A5在肝癌中的发生发展作用奠定了基础。

• 单位
  哈尔滨医科大学大庆校区