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摘要
目的 通过网络药理学预测加味独活寄生合剂治疗腰椎间盘突出症（lumbar disc herniation, LDH）的相关机制，并通过体外实验验证。方法 应用TCMSP、BATMAN-TCM数据库检索加味独活寄生合剂组成药物的活性成分以及潜在靶点。通过GeneCards、OMIM数据库搜集LDH相关的疾病靶点，构建“药物-化合物-疾病靶标”网络模型，获取加味独活寄生合剂干预LDH的交集靶标。运用STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction, PPI）网络获取核心靶点。使用R语言软件及Perl语言进行GO分析与KEGG通路分析获得可能的关键通路。提取原代终板软骨细胞，进行细胞形态学观察以及Ⅱ型胶原蛋白（CollagenⅡ）免疫荧光染色鉴定。将体外培养的第3代终板软骨细胞随机分成5组：空白对照组、模型对照组、加味独活寄生合剂低剂量组、加味独活寄生合剂中剂量组、加味独活寄生合剂高剂量组。其中后4组使用添加含有10 ng/mL的白细胞介素17(interleukin-17, IL-17)的DMEM培养基对细胞进行诱导退变造模。流式细胞技术检测各组细胞周期；ELISA检测各组细胞IL-6的含量；实时荧光定量PCR检测p-p65、MMP9 mRNA的表达；Western blot法检测p-p65、MMP9蛋白表达情况。结果 网络药理学结果显示，根据ADME标准共筛选加味独活寄生汤19种药物共计295种活性成分，与LDH的疾病靶标相匹配得到交集靶标50个。通过PPI提取得到IL-6成为核心靶标可能性最大，GO分析和KEGG通路分析得到IL-17相关信号途径的富集因子较高。体外实验结果：相比于空白对照组，其他各组细胞生长情况明显受到抑制（P<0.05）；相比于模型对照组，加味独活寄生合剂各组生长情况明显受到促进（P<0.05）。相比于空白对照组，模型对照组及加味独活寄生合剂各组IL-6、p-p65、MMP9表达显著升高（P<0.05）；相比于模型对照组，加味独活寄生合剂各组IL-6、p-p65、MMP9表达显著降低（P<0.05）。结论 加味独活寄生合剂通过多靶点、多通路抑制炎症反应和细胞凋亡，可能通过调控IL-17/NF-κB，促进终板软骨细胞的增殖，抑制IL-6以及MMP9的表达，从而发挥对LDH的治疗作用。
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