红景天苷对PM2.5诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤及凋亡的影响

作者：柯鸿阳; 赵佳丽; 马璇; 欧阳钏; 刘玉梅; 张丽雯; 李晓红^*; 谭金峰; 于丽; 徐东群; 王秦; 李万伟^*

来源：毒理学杂志, 2023, 37(04): 303-322.

DOI：10.16421/j.cnki.1002-3127.2023.04.014

• 细颗粒物
• 氧化应激
• 细胞凋亡
• 红景天苷

目的 探讨红景天苷(salidroside, SAL)对大气细颗粒物(fine particulate matter, PM2.5)导致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(RLE-6TN)损伤及凋亡的保护机制。方法 梯度浓度SAL预处理细胞24 h,加入PM2.5染毒24 h,实验分为6组：0组(无血清培养基),SAL组(160μmol/L SAL),PM2.5组(50μg/ml的PM2.5溶液),40μmol/L+PM2.5组(40μmol/L SAL+50μg/ml PM2.5),80μmol/L+PM2.5组(80μmol/L SAL+50μg/ml PM2.5),160μmol/L+PM2.5组(160μmol/L SAL+50μg/ml PM2.5)。倒置显微镜观察细胞形态变化，噻唑蓝法测定细胞活力；试剂盒结合酶标仪测定细胞上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平，细胞内总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase, T-SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平；采用DCFH-DA、Annexin V-FITC/PI和JC-1探针法结合激光共聚焦检测荧光强度以确定细胞活性氧(reactive oxygen species, ROS)、细胞凋亡和线粒体膜电位水平；Western blot检测细胞内Bcl-2、p53、BAX、Fas、FADD、Cytochrome c、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达。结果 PM2.5组细胞形态变圆，细胞间隙变大，各SAL+PM2.5组形态有所好转，与0组相比，细胞活力降低(P<0.05),LDH和MDA水平升高(P<0.05),T-SOD和GSH活力下降(P<0.05),ROS、凋亡水平升高(P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.05),胞内p53、BAX、Fas、FADD、Cytochrome c、Caspase-3和Caspase-9表达提高，Bcl-2下降(P<0.05)。与PM2.5组相比，160μmol/L+PM2.5组细胞活力好转(P<0.05),80～160μmol/L+PM2.5组LDH水平下降，GSH活力提高(P<0.05),160μmol/L+PM2.5组MDA水平下降，SOD活力提高(P<0.05),160μmol/L+PM2.5组ROS、凋亡水平均明显下降(P<0.05),线粒体膜电位上升(P<0.05),80～160μmol/L+PM2.5组p53、BAX、Fas、FADD、Cytochrome c和Caspase-3蛋白表达均下降(P<0.05),160μmol/L+PM2.5组Caspase-9表达下降(P<0.05),160μmol/L+PM2.5组Bcl-2表达明显提升(P<0.05)。结论 50μg/ml PM2.5暴露可诱导大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤，引起氧化应激和凋亡，40～160μmol/L SAL均有不同程度的保护作用，具体机制可能是通过影响大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞内p53/BAX/Bcl-2和Fas/FADD通路来实现的。

• 单位
  潍坊医学院; 公共卫生学院; 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所; 基础医学院