重组人载脂蛋白AⅠ米兰突变体在酵母中的分泌表达

作者：张彦; 赵志安; 王明贵; 宋大新

来源：复旦学报(自然科学版), 2008, (03): 306-310.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.2008.03.002

• 载脂蛋白AⅠ米兰突变体
• 毕赤酵母
• 分泌表达
• 优化表达

将重组质粒pPIC9K-apoAⅠ-milano用BglⅡ酶切后转化Pichia pastorisGS115菌株,筛选得到G418高抗性转化子,经甲醇诱导和摇瓶发酵,用SDS-PAGE与Western blot检测上清液,发现有明显的重组人载脂蛋白AⅠ米兰突变体(rAIM)表达,但其分子量比正常蛋白小.对酵母工程菌的摇瓶发酵条件进行优化后,rAIM表达水平得到提高,约为70 mg/L发酵液,其中正常大小的rAIM所占的比例约为80%.采用冷丙酮沉淀法初步纯化了酵母工程菌发酵液中的rAIM,并验证其有磷脂结合能力.

• 单位
  复旦大学附属华山医院; 复旦大学; 生命科学学院