核仁素的蛋白质-RNA杂交体系诱饵载体的构建及表达

作者：蒋碧梅; 何淑雅; 苏娇; 王桂良; 王海云; 肖献忠

来源：医学临床研究, 2007, (03): 353-356.

DOI：10.3969/j.issn.1671-7171.2007.03.001

• 遗传载体
• 蛋白质类
• RNA genetic vectors
• proteins
• RNA

【目的】将核仁素开放阅读框构建到Hybrid Hunter蛋白质-RNA杂交系统pYESTrp3“饵”载体,明确其在酵母细胞中的表达,排除自身激活作用,验证其能否用于蛋白质-RNA杂交体系筛选cDNA文库。【方法】设计引物,从真核表达载体pEGFP-N1-C23上,扩增出C23开放阅读框,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,克隆到蛋白质-RNA杂交的“饵”载体pYESTrp3质粒上,构建成载体pYESTrp3-C23。阳性克隆经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定后,转入酵母中,用酵母蛋白抽提物作Western杂交,证实其表达;滤膜印记杂交验证其有无自身激活作用。【结果】所构建的载体pYESTrp3-C...

• 单位
  中南大学湘雅医学院; 南华大学