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摘要
目的探讨以重组腺相关病毒(rAAV)为载体,评价心肌点注射和蛛网膜下腔注射转导神经生长因子(NGF)基因对1型糖尿病大鼠心脏损伤的保护作用。方法全实验包括两个子实验。实验一:将12只SPF级雄性SD大鼠采用随机数字表法分为2组(n=6):对照组、糖尿病(DM)组,DM组大鼠通过注射链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病模型,2组大鼠于注射STZ前1 d及后第1、2、4、6、8、9周测甩尾反射潜伏期,并在第9周时通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组织中的NGF、降钙素基因相关肽(CGRP)含量。实验二:24只SPF级雄性SD大鼠随机分为4组(n=6):糖尿病心脏转染对照组(MC)组、糖尿病心脏转染(ME)组、糖尿病脊髓转染对照(SC)组、糖尿病脊髓转染(SE)组,采用2×2析因设计,4组糖尿病模型建模方法同DM组,成模后第4周,MC组和ME组以心脏点注射分别转染滴度为0.8×1013μg/L携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV9-GFP)和相同滴度的携带NGF基因的rAAV-GFP(rAAV9-NGF-GFP),各100μL;SC组和SE组以蛛网膜下腔注射分别转染滴度为0.8×1012μg/L的rAAV2-GFP和相同滴度的rAAV2-NGF-GFP,各25μL。5周后,测各组大鼠心功能指标。取心肌、T1-T5段脊髓及背根神经节组织,荧光显微镜下观察GFP的表达情况;采用ELISA测各组织中的NGF、CGRP含量。结果实验一中,与对照组相比,DM组的甩尾反射潜伏期在第4周后明显延长(P<0.05),心肌组织中的NGF、CGRP明显下调(P<0.05)。实验二中,心肌点注射法转染rAAV9-NGF-GFP可改善大鼠的各项心功能指标(P<0.05),上调心肌组织中NGF、CGRP蛋白含量(P<0.05);且实验过程中的转染物与转染途径之间存在交互效应,两者联用改善心功能和上调心肌组织中NGF、CGRP的效果更显著(P<0.05)。结论心肌点注射rAAV-NGF-GFP可以更有效地提高1型糖尿病大鼠心肌组织中NGF的表达,产生更有效的心脏保护作用。
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单位山西医科大学第二医院; 山西医科大学
