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摘要
目的研究纳美芬缺血后处理通过AMPK/Nrf2/HO-1途径减轻肺缺血-再灌注损伤的作用机制及给药时效性。方法将90只大鼠随机(随机数字表法)均分为模型组、纳美芬A、B、C、D、E、F、G组、假手术组共9组, 每组10只。模型组大鼠采用阻断左肺门法建立肺缺血-再灌注模型, 未予药物治疗。造模后纳美芬A、B、C、D组大鼠分别于肺循环再灌注前5 min、再灌注后10 min、30 min、60 min时予尾静脉注射纳美芬(小剂量组, 15 μg/kg)。纳美芬E组大鼠于肺循环再灌注后60 min时予尾静脉注射纳美芬(30 μg/kg)。纳美芬F、G组大鼠分别于造模前2 h腹腔注射化合物C(20 mg/kg)、ML385(30 mg/kg), 同时在肺循环再灌注前5 min时尾静脉注射纳美芬(15 μg/kg)。假手术组大鼠不行缺血-再灌注处理, 未予药物治疗。各组大鼠于再灌注3 h末处死后均留取左肺上叶组织, 通过病理切片观察评估肺组织损伤评分, 检测肺组织湿/干重比值, 以生化法检测肺组织TNF-α和丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性, RT-PCR法测定肺组织核因子E2相关因子2((nuclear factor erythroid-2 related factor 2, Nrf2) )mRNA、血红素加氧酶1(heme oxygenase 1, HO-1)mRNA表达水平以及Western blot法检测大鼠肺组织AMP依赖的蛋白激酶(Adenosine 5’’-monophosphate (AMP)-activated protein kinase, AMPK)、p-AMPK(磷酸化AMPK)、Nrf2、HO-1表达水平。结果与模型组比较, 纳美芬D组湿/干重比值、肺组织损伤评分、p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、TNF-α和MDA含量、SOD活性差异均无统计学意义(均P >0.05)。与模型组、纳美芬D组比较, 纳美芬E组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量下降, 差异有统计学意义(均P < 0.01), p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、SOD活性增高, 差异有统计学意义(均P < 0.01)。与模型组比较, 纳美芬F组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量下降, 差异有统计学意义(均P < 0.01), Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性增高, 差异有统计学意义(均P < 0.01), p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平差异均无统计学意义(均P >0.05)。与纳美芬A组比较, 纳美芬F组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量增高, 差异有统计学意义(均P < 0.01), p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性降低, 差异有统计学意义(均P < 0.01)。与模型组比较, 纳美芬G组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α含量下降, p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平增高, 差异有统计学意义(均P < 0.01), Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、MDA含量、SOD活性差异均无统计学意义(均P >0.05)。与纳美芬A组比较, 纳美芬G组湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量增高, 差异有统计学意义(均P < 0.01), p-AMPK、p-AMPK/AMPK表达水平差异均无统计学意义(均P >0.05), Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平和SOD活性降低, 差异有统计学意义(均P < 0.01)。小剂量(15 μg/kg)纳美芬缺血后处理各组在湿/干重比值、肺组织损伤评分、TNF-α和MDA含量方面呈现纳美芬D>纳美芬C>纳美芬B>纳美芬A的特点, 在p-AMPK、p-AMPK/AMPK、Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2、HO-1表达水平、SOD活性方面呈现纳美芬A>纳美芬B>纳美芬C>纳美芬D的特点, 上述结果差异均存在统计学意义(均P < 0.01)。结论盐酸纳美芬缺血后处理可通过AMPK/Nrf2/HO-1通路抑制氧化应激, 减轻肺缺血-再灌注损伤, 此作用具有时效性特点, 超过某一特定有效时间窗口时, 纳美芬治疗对肺缺血-再灌注损伤可能无效, 增大药物剂量可能改变或延长有效时间窗。
