猪萨佩罗病毒VP1蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：孔祥雨; 曹丽艳; 索学鹏; 王娅婷; 张宇; 段月月; 袁聪; 施磊; 郑海学^*; 王琦^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(03): 339-345.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0054

• 猪萨佩罗病毒
• VP1蛋白
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了检测猪萨佩罗病毒（porcine sapelovirus,PSV），本研究制备了PSV衣壳蛋白VP1的多克隆抗体。参照本团队分离毒株（PSV GS01）序列，将VP1基因与原核表达载体pET-32a（+）连接，构建pET-32aVP1重组质粒，将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中，经IPTG诱导表达，获得重组蛋白，利用Ni-NTA亲和层析柱纯化VP1蛋白。用纯化后的VP1蛋白免疫BALB/c小鼠及新西兰大白兔，获得多克隆抗体，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹试验（Western-blot）及免疫荧光试验（IFA）验证其反应性。ELISA结果显示，获得的多克隆抗体的效价均高于1∶1 638 400;Western-blot及IFA结果显示，该多克隆抗体能特异性识别PSV感染表达的VP1蛋白，说明该重组蛋白具有良好的反应性。本研究成功表达了PSV VP1蛋白，并制备了小鼠和家兔多克隆抗体，这为后期建立PSV诊断方法及致病机制的研究奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所