黑曲霉果胶裂解酶基因在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的表达

作者：强慧妮; 杨欣伟; 田宝玉; 柯崇榕; 林伟铃; 吕睿瑞; 黄薇; 王春香; 黄建忠

来源：生物工程学报, 2009, 25(12): 1962-1968.

DOI：10.13345/j.cjb.2009.12.024

• 黑曲霉
• 果胶裂解酶
• 毕赤酵母
• 表达

利用RT-PCR技术从黑曲霉(EIM-6)中扩增得到去除信号肽的果胶裂解酶基因A,将其插入到毕赤酵母表达载体pPIC9k上,构建重组表达质粒pPIC9K-pelA,电击转化毕赤酵母GS115,得到了表达成功的工程菌株。用终浓度为1.5%的甲醇对其进行诱导,将发酵上清液浓缩后,用盐酸法测定其酶活可以达到2.3U/mL。通过对重组毕赤酵母诱导表达产物进行SDS-PAGE鉴定,发现重组毕赤酵母分泌了1个约38kD的蛋白,与该酶基因产物的理论值相符,并通过水解圈法测定验证,均说明果胶裂解酶得到正确的分泌表达.

• 单位
  生命科学学院; 福建师范大学