田蓟苷抗H9c2心肌细胞缺血再灌注损伤的作用机制研究

作者：杨洁; 郑瑞芳; 都研文; 李海宁; 李少将; 刘砥威^*; 邢建国^*

来源：药学学报, 2021, 56(04): 1070-1078.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2020-1636

• 田蓟苷
• 心肌缺血再灌注损伤
• 程序性坏死
• 钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ
• 线粒体膜通透性转换孔

本研究利用泛caspase抑制剂Z-VAD-FMK联合缺氧/复氧(hypoxia-reoxygenation, H/R)损伤建立大鼠H9c2心肌细胞程序性坏死模型,并考察田蓟苷抗心肌缺血再灌注损伤的作用机制。采用CCK-8 (cell counting kit-8)测定细胞活力;采用试剂盒法检测细胞培养上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD); Hoechst 33342/PI染色检测细胞死亡方式;采用DCFH-DA、BBcellProbe TMM61和JC-1探针依次检测细胞内活性氧(reactive oxygen species, ROS)、线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore, mPTP)开放和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)改变; ELISA法检测细胞分泌肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)和白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)释放情况;分子对接技术锁定田蓟苷作用的分子靶标; Western blot检测相关蛋白表达。结果表明,与对照组比较, H/R损伤诱导的模型组细胞活力下降,程序性坏死率升高, LDH水平升高, SOD活性降低, ROS释放显著增多,mPTP开放, MMP降低, TNF-α、IL-1β以及IL-6水平升高,而田蓟苷则可剂量依赖性地改善这些因素变化。分子对接结果显示,田蓟苷可与钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II (calmodulin-dependent protein kinase II, CaMKII)结合。Western blot结果显示,与对照组比较,模型组细胞p-CaMKII和磷酸化混合系结构域样蛋白(phospho-mixed lineage kinase domain-like protein, p-MLKL)表达水平显著升高;与模型组比较,田蓟苷则使这些蛋白表达水平降低。上述结果表明,田蓟苷能够保护H9c2心肌细胞,可能通过抑制CaMKII苏氨酸Thr287位点磷酸化,抑制mPTP开放,保护线粒体功能以阻止程序性坏死进行,对H/R损伤治疗新方法的研究具有潜在价值。

• 单位
  石河子大学; 新疆医科大学; 新疆药物研究所