人睾丸新基因SPAG4L的原核表达与纯化

作者：蒋先镇; 杨明刚; 邢晓为

来源：南方医科大学学报, 2010, (09): 2047-2050.

• SPAG4L
• 克隆
• 原核表达
• 融合蛋白 SPAG4L
• clone
• prokaryotic expression
• fusion protein
• spermatogenesis

目的原核表达人睾丸生精相关基因SPAG4L,并对重组蛋白进行纯化,为下一步研究SPAG4L的生物学功能奠定基础。方法运用RT-PCR从人睾丸中扩增编码SPAG4L126-379的基因片段,并将PCR产物克隆至pUCm-T载体。用限制性内切酶EcoR I和Hind III消化后,将目的片段克隆至带有6个组氨酸标签的原核表达载体PQE30中。重组质粒PQE-30-SPAG4L经酶切和测序验证后,转化大肠杆菌JM15,IPTG诱导融合蛋白表达。SPAG4L融合蛋白以westernblot进行鉴定,最后用NI-NTA磁性琼脂糖珠进行纯化。结果成功构建了重组表达质粒PQE-30-SPAG4L,并能够在大...

• 单位
  中南大学湘雅三医院