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摘要
为构建金黄色葡萄球菌黏附素基因原核表达质粒,采用PCR方法对凝集因子A(ClfA)的A区、纤连蛋白(FnBPs)A和B的D区基因进行特异性扩增,构建了克隆质粒pMD19T-ClfA、pMD19T-FnBPA和pMD19T-FnBPB,然后将克隆基因定向插入到原核表达载体pET32a(+)中,构建了表达质粒pET32-ClfA、pET32-FnBPA和pET32-FnBPB,并将其转入宿主菌BL21(DE3),经SDS-PAGE分析表明,1mmol/L IPTG诱导后,在57ku、35ku和35ku处出现了与目的蛋白一致的外源蛋白带;经western-blot分析表明,所表达的蛋白均与目的蛋白一致,说明外源基因成功表达,且表达产物具有良好的免疫原性。
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