长链非编码RNA CTB-92J24.3通过调控miR-135b-5p表达对高糖条件下肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响

作者：沈旭; 刘俊^*; 李建新; 曾龙; 高云; 王思佳

来源：山西医科大学学报, 2022, 53(05): 578-583.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2022.05.011

• 肾小管上皮细胞
• CTB-92J24.3
• miR-135b-5p
• 增殖
• 凋亡

目的 探讨高糖培养的人肾小管细胞HK-2中长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)CTB-92J24.3对miR-135b-5p表达的调控机制及对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 以高糖(25 mmol/L葡萄糖)培养人肾小管细胞HK-2,采用慢病毒过表达技术上调HK-2细胞中CTB-92J24.3的表达作为CTB-92J24.3组，以空载慢病毒感染为control组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测两组HK-2细胞中CTB-92J24.3的表达差异。MTT法检测两组HK-2细胞的增殖活性。流式细胞术实验检测两组HK-2细胞的凋亡率。采用miRcode软件预测CTB-92J24.3作用结合的微小RNA(miRNA)。采用双荧光素酶报告基因实验验证CTB-92J24.3和下游miRNA之间的结合。qRT-PCR分别检测下游miRNA和miRNA靶基因的表达。Western blot检测miRNA靶基因蛋白、促增殖相关蛋白(CDK2、Cyclin E)及促凋亡相关蛋白(Bax、Bak)的表达。结果 与control组相比，CTB-92J24.3组HK-2细胞中CTB-92J24.3表达显著增加(P<0.01),HK-2细胞增殖活性显著升高(P<0.05),HK-2细胞凋亡显著降低(P<0.01)。CTB-92J24.3的靶基因是miR-135b-5p,两者能够互补结合(P<0.01)。与control组相比，CTB-92J24.3组HK-2细胞中miR-135b-5p表达降低(P<0.01),miR-135b-5p的靶基因骨成型蛋白7(bone morphogenic protein 7,BMP7)基因表达明显增加(P<0.01)。与control组相比，CTB-92J24.3组HK-2细胞中BMP7、CDK2、Cyclin E表达增加(P<0.01),Bax、Bak蛋白表达降低(P<0.01)。结论 CTB-92J24.3能够抑制高糖培养的肾小管上皮细胞HK-2中miR-135b-5p的表达水平，上调BMP7基因的表达，促进肾小管上皮细胞的增殖并抑制其凋亡。

• 单位
  荆门市第二人民医院; 荆楚理工学院