绵羊肺炎支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作者：韩瑞鑫; 申捷; 申之义

来源：中国兽医科学, 2018, 48(08): 965-970.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0151

• 绵羊肺炎支原体
• HSP70基因
• TaqMan实时荧光定量PCR

本研究旨在建立一种灵敏性高、特异性强的检测绵羊肺炎支原体的TaqMan实时荧光定量PCR方法。根据GenBank上已发表的绵羊肺炎支原体HSP70基因序列设计引物和探针,构建标准阳性质粒,建立实时荧光定量PCR方法。试验结果显示,该方法标准曲线的线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=1.000,斜率S=-3.334,扩增效率E=99.5%;敏感性高,可以检测出的最低样品浓度为1×101copies/L,是普通PCR的100倍;特异性强,能有效区分巴氏杆菌等9种病原;重复性好,组内、组间的Ct值变异系数均小于2%。运用本试验建立的实时荧光定量PCR方法可简便、准确地鉴定绵羊肺炎支原体。

• 单位
  内蒙古农业大学; 内蒙古自治区动物疫病预防控制中心