肠出血性大肠杆菌z5150毒素基因在细胞黏附过程中的作用

作者：何志利; 谭琳琳; 王建新; 李崭; 陈芳红; 李涛; 王慧

来源：军事医学, 2017, 41(12): 978-982.

• 肠出血性大肠杆菌
• Red重组系统
• 毒素
• Rel E
• 致病性

目的通过体内过度表达验证z5150基因毒性,利用Red重组系统构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)z5150基因缺失突变株并探究其致病力。方法在菌体内过度表达z5150基因,测定细菌生长曲线验证其毒性。应用PCR技术扩增出含有卡那霉素抗性基因的目的基因上下游同源臂片段,电转入含有p KD46质粒的EHEC中,在阿拉伯糖诱导下使打靶片段重组到基因组。卡那霉素基因的两端包含FRT位点,p FLP2质粒可介导FLP位点专一性重组去除抗性标记。经DNA测序验证目的基因缺失后,通过菌株感染HT29细胞和BALB/c雌鼠检测缺失株细胞黏附能力和毒力的改变。结果与结论成功构建EHEC△z5150缺失突变株。z5150的缺失不影响细菌的正常生长,但过度表达后明显抑制细菌生长,发挥毒素效应。与野生株相比,EHEC△z5150缺失突变株对肠上皮细胞黏附能力明显增强;小鼠致死率增高,提示其致病力增强。该研究为EHEC基因功能研究提供了基因敲除技术,证明了Rel E家族z5150参与EHEC细胞黏附,并增强菌株毒力,为进一步研究EHEC致病机制奠定了基础。

• 单位
  病原微生物生物安全国家重点实验室; 安徽医科大学