E.tenella河北株EtMIC-2基因的克隆及毕赤酵母系统表达

作者：张召兴; 李佩国^*; 李蕴玉^*; 张香斋; 贾青辉; 张艳英; 丁咚

来源：中国兽医学报, 2020, 40(05): 939-942.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.05.12

• 柔嫩艾美耳球虫
• EtMIC-2基因
• 毕赤酵母系统
• Western blot

为表达鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)河北株EtMIC-2蛋白,本试验采用RT-PCR方法克隆出E.tenella河北株EtMIC-2基因,连接到毕赤酵母分泌表达载体pPIC9中,构建重组表达载体pPIC9-EtMIC-2。将其线化后转化到巴斯德毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达,饱和硫酸铵4℃沉淀浓缩后,用His选择镍-亲和层析柱纯化EtMIC-2蛋白。采用SDS-PAGE和Western blot方法验证其蛋白的表达。结果表明,构建的重组表达载体pPIC9-EtMIC-2在毕赤酵母菌中表达出相对分子质量约为45 000的目的蛋白,表达的EtMIC-2蛋白能被E.tenella阳性血清识别,具有良好的免疫反应原性。为进一步研究EtMIC-2蛋白功能及构建DNA疫苗奠定基础。

• 单位
  河北科技师范学院; 河北旅游职业学院; 沧州职业技术学院