摘要
目的 探讨适合现代医学实验室的高效组织总RNA提取方法,以及组织样本储存时间对后续实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测有效性的影响。方法 分别采用全自动样本处理器+磁珠法全自动核酸提取(方法1)、全自动样本处理器+离心柱法(方法2)、手工匀浆器+磁珠法全自动核酸提取(方法3)和手工匀浆器+离心柱法(方法4)4种方法制备小鼠新鲜心、肝、肾组织总RNA,比较各方法制备的总RNA质量。评价方法1和方法4制备的新鲜、-80℃储存1年和2年的小鼠肝组织总RNA质量及其对qRT-PCR检测结果的影响。结果 方法1制备的小鼠新鲜组织总RNA浓度、完整性均优于其他3种方法。方法1制备的1年和2年肝组织总RNA完整性均明显优于方法4。3个不同储存时间肝组织样本的Ct值范围分别为18~19、21~22和27~28,2年肝组织样本总RNA降解明显。结论 方法1是最佳的组织总RNA制备方法,尤其针对保存2年内的稀有生物样本。用于qRT-PCR检测的生物样本于-80℃储存时间最好不超过1年。
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单位贵州中医药大学; 第二临床医学院