牛诺如病毒和牛嵴病毒及牛环曲病毒三重RT-PCR检测方法的建立

作者：孙睿雪; 李玉铎; 吴**; 陈天杰; 车瑞香; 茹毅; 韩欢胜; 赵建军^*

来源：中国兽医科学, 2023, 1-13.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2024.0052

• 牛诺如病毒
• 牛嵴病毒
• 牛环曲病毒
• 三重RT-PCR

为了解牛诺如病毒(BNoV)、牛嵴病毒(BKV)和牛环曲病毒(BToV)在国内的流行情况，本研究参考GenBank中登录的BNoV RdRp基因、BKV 3D基因和BToV N基因保守区域，设计3对特异性引物，成功建立了能够同时快速检测BNoV、BKV、BToV的三重RT-PCR方法。该方法特异性较强，仅对BNoV、BKV、BToV扩增出特异性条带，对其他5种常见引发犊牛腹泻的病毒均未扩增出条带；敏感性较高，针对pMD18-T-BNoV、pMD18-T-BKV和pMD18-T-BToV质粒标准品的最低检测限分别为2.73×104 copies/μL、2.87×104 copies/μL、3.18×103 copies/μL；重复性好，同批次样品的3次检测结果均一致。使用该方法对153份临床样品进行检测，结果显示，BNoV、BKV、BToV的阳性率分别为11.11%、25.49%、38.56%，3种病毒混合感染率为7.18%。与其他学者建立的单一RT-PCR检测方法相比，符合率分别为94.77%、93.46%、91.50%。上述结果表明，本试验建立的三重RT-PCR方法为犊牛上述国内新发病毒快速检测及流行病学调查提供了技术支撑。

• 单位
  动物科技学院; 黑龙江八一农垦大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所