鳗鲡疱疹病毒实时荧光重组酶辅助扩增（RAA）检测方法的建立及其应用

作者：陈曦; 杨金先; 葛均青^*

来源：大连海洋大学学报, 2023, 1-10.

DOI：10.16535/j.cnki.dlhyxb.2023-216

• 鳗鲡疱疹病毒(AngHV)
• 实时荧光RAA
• 快速检测

为建立鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus， AngHV)的实时荧光重组酶辅助扩增(Recombinase-aided Amplification， RAA)检测方法，根据AngHV的ORF95基因序列，设计引物和探针，优化反应温度，确定反应时间，并应用该方法对采集的临床样品进行了检测。结果表明：建立的实时荧光RAA检测的最佳反应温度为39 ℃，反应时间为20 min；进一步评价该检测方法的灵敏性、特异性及重复性，结果显示，实时荧光RAA检测AngHV的最低拷贝数为102个，可特异性地检测AngHV，与美洲鳗鲡腺瘤病毒(American Eel Adomavirus， AEAdoV)、蛙虹彩病毒(Rana grylio virus，RGV)、鲤疱疹病毒(Koi herpes virus，KHV)和对虾白斑综合症病毒(White spot syndrome virus，WSSV)均无交叉反应；该检测方法的组内和组间变异系数均小于5%，表明实时荧光RAA检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好；应用该方法对25份采集的临床样品进行检测，结果显示，实时荧光RAA检测方法和qPCR的检出率一致，均为92%，高于普通PCR的检测率76%。研究表明， 本研究中所建立的鳗鲡疱疹病毒的实时荧光重组酶辅助扩增检测方法快速、灵敏、可靠、准确，可用于AngHV的临床快速检测和流行病学调查。

• 单位
  福建省农业科学院