草鱼miR-218鉴定及其对鱼淋巴囊肿病毒中国株感染的调控作用

作者：黄鉴涛; 胡海浩; 马嘉霖; 战盈瑾; 闫秀英^*; 简纪常

来源：广东海洋大学学报, 2023, 43(04): 52-61.

• 草鱼卵巢细胞系
• cid-miR-218家族
• 鱼淋巴囊肿病毒中国株
• 靶基因
• 白介素10

【目的】鉴定草鱼（Ctenopharyngodon idella）miR-218(cid-miR-218)家族成员，分析cid-miR-218在鱼淋巴囊肿病毒中国株（LCDV-cn）感染草鱼卵巢细胞系（Grass carp ovary cells,GCO）过程中的表达特性，探索cid-miR-218-5p对LCDV-cn感染的调控作用。【方法】从LCDV-cn感染的GCO细胞中，通过茎环RT-PCR获取cid-miR-218家族成员，并进行测序验证和生物信息学分析；用定量PCR分析cid-miR-218家族在LCDV-cn感染GCO过程中的表达；用生物信息学方法预测cid-miR-218家族的靶基因，并利用双荧光素酶报告基因系统验证cid-miR-218-5p的靶基因；通过转染cid-miR-218-5p mimic和cid-miR-218-5p inhibitor上调和下调cid-miR-218-5p的表达，用定量PCR分析cid-miR-218-5p、靶基因il-10和LCDV-cn mcp基因的表达情况；应用GO和KEGG数据库，对cid-miR-218家族可能参与调控的信号通路进行富集分析。【结果】在LCDV-cn感染GCO过程中，鉴定到cid-miR-218-5p、cid-miR-218a、cid-miR-218b、cid-miR-218b-1和cid-miR-218b-2等5个cid-miR-218家族成员，其中cid-miR-218-5p的表达呈先升后降再上升的变化趋势，且差异表达最显著（P <0.05）；经生物信息学分析预测，cid-miR-218家族成员有较多共同的潜在靶基因，il-10是共有的靶基因。经验证，pmirGLO-il-10重组质粒与家族成员代表cid-miR-218-5p结合后，其荧光素酶活性降低（P <0.05），证明il-10是cid-miR-218-5p的靶基因。cid-miR-218-5p过表达后，il-10与LCDV-cn mcp表达均显著下降（P <0.05），而抑制cid-miR-218-5p表达后，il-10与LCDV-cn mcp表达则显著上升（P <0.05）。预测表明cid-miR-218家族参与调控病毒感染致瘤相关信号通路。【结论】在LCDV-cn感染GCO过程中，cid-miR-218家族中cid-miR-218-5p起重要调控作用；cid-miR-218-5p负调控其靶基因il-10的表达，并负调控LCDV-cn mcp基因的表达；cid-miR-218-5p和IL-10对鱼淋巴囊肿病诊断和防控有潜在的临床应用价值。

• 单位
  广东海洋大学