重组羧肽酶原B的复性方法研究

作者：张晓彦; 刘海峰; 袁勤生

来源：微生物学通报, 2005, (02): 39-44.

DOI：10.13344/j.microbiol.china.2005.02.010

• 羧肽酶原B
• 包涵体
• 凝胶过滤
• 稀释
• 透析
• Ni2 亲合层析 Pro-carboxypeptidase B
• Inclusion bodies
• Urea gradient gel filtration refolding
• Dilution
• Dialysis
• Ni 2 immobilize metal affinity chromatography

构建的羧肽酶原B表达质粒在大肠杆菌中获得高表达。但目的蛋白是以包涵体的形式存在。为了获得活性羧肽酶B,必须对其包涵体进行变复性。首先利用稀释复性确定了羧肽酶原B复性的最佳缓冲液;在凝胶过滤复性中,研究了柱长和洗脱流速对羧肽酶原B复性效率的影响;另外对比了稀释复性、透析复性、凝胶层析复性和Ni2+亲合层析法等四种方法对羧肽酶原B的复性效果。结果发现,这4种方法的复性效果有以下顺序:凝胶过滤复性>稀释复性>Ni2+亲合层析>透析复性。

• 单位
  华东理工大学; 生物反应器工程国家重点实验室