三种酵母启动子在毕赤酵母中的功能比较

作者：蒋慧慧; 李丰功; 陆毅; 饶志明

来源：中国生物工程杂志, 2011, 31(5): 60-68.

• 3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子
• pAOX1
• pGAP
• 毕赤酵母
• 绿色荧光蛋白

启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子功能的强弱对于目的基因的表达非常重要.为找到一个启动转录功能较好的启动子,以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因,在毕赤酵母中研究不同启动子对外源蛋白表达的影响.首先采用PCR扩增的方法克隆了酿酒酵母甘油合成关键酶3-磷酸甘油脱氢酶基因启动子pScgpd,借助于载体pPIC9K和pGAPZB,构建pPIC9K-gfp和pPIC9K-PG,pGAPZB-gfp和pGPDZB-gfp,将重组载体分别转入毕赤酵母GS115和毕赤酵母X33中,在不同渗透压条件下培养重组菌,通过GFP的表达情况比较启动子pScgpd与甲醇氧化酶启动子pAOX1、3-磷酸甘油醛脱氢酶启动子pGAP的功能.荧光显微镜观察结果显示,pScgpd表现为受高渗条件诱导,重组毕赤酵母P.pastoris GS115和P.pastoris X33均能产生稳定的荧光,且在一定范围内随着葡萄糖或NaCI浓度的增加,GFP表达强度也有所增加;但分别与对应宿主P.pastorisGS115、P.pastoris X33的启动子paOX1和启动子pGAP相比,表达水平仍较弱.

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 生物工程学院