FDFT1基因重组慢病毒表达载体的构建及其表达测定

作者：陈晓颖; 易雪丽; 陆飞燕; 曾怡^*

来源：右江民族医学院学报, 2021, 43(02): 169-173.

• FDFT1
• 293T细胞
• 慢病毒
• 基因重组

目的构建法尼基二磷酸法尼基转移酶1(farnesyl diphosphate farnesyl transferase 1,FDFT1)基因重组质粒并在人胚肾上皮细胞(293T)验证质粒表达。方法设计FDFT1基因引物并经两次PCR扩增获取FDFT1目的基因;用相应的限制性内切酶将pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP(pCDH-GFP)质粒线性化;FDFT1基因及线性化载体经纯化后以同源重组反应连接构建重组质粒;重组质粒通过菌落PCR、双酶切验证并测序做进一步验证;在293T细胞中利用三质粒共转染法包装FDFT1目的质粒并收集含病毒的上清液;以病毒液感染293T细胞验证FDFT1基因表达。结果菌落PCR及双酶切说明目的基因成功插入载体质粒,测序结果说明重组质粒中FDFT1基因与NCBI中登记的相应基因同源。构建成功的pCDH-GFP-FDFT1质粒包装为慢病毒后感染293T细胞,可检测到细胞中FDFT1基因表达与对照病毒感染相比升高15.13倍。结论本研究成功构建高表达FDFT1基因的重组慢病毒表达载体,为进一步研究FDFT1基因在肿瘤中的作用机制提供了实验基础。

• 单位
  右江民族医学院附属医院; 右江民族医学院