干预肝细胞氧化应激感受器Keap1对肝星状细胞基质金属蛋白酶-2表达及其活性调节的影响

作者：蔡盈盈; 陈平圣^*

来源：东南大学学报(医学版), 2019, 38(06): 947-953.

• Kelch样ECH相关蛋白1
• 基质金属蛋白酶-2
• 缺氧

目的:建立稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Kelch样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein1, Keap1)的模型,探讨稳定下调Keap1的缺氧肝细胞对小鼠肝星状细胞(HSCs)基质金属蛋白酶-2(MMP-2)活性及其调控分子基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)、MMP-14、小窝蛋白-1(Cav-1)的影响。方法:根据本组建立的方法,构建Keap1下调的稳转肝细胞株,缺氧条件下培养Keap1下调的肝细胞,通过蛋白质印迹法和QPCR验证肝细胞中Keap1mRNA是否下调以及其下游分子和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。利用上述肝细胞培养上清液干预小鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分别收集小鼠HSC-T6细胞培养上清液和细胞,通过蛋白质印迹法检测小鼠HSC-T6细胞的Keap1、抗氧化应激分子核因子E2相关因子2(Nrf2)、MMP-2等蛋白表达,明胶酶谱法检测小鼠HSC-T6细胞培养液上清中MMP-2活性。结果:稳定敲低肝细胞内氧化应激感受器Keap 1后,Nrf2表达增高,肿瘤坏死因-α(TNF-α)表达减少。与对照组相比,敲低Keap1的肝细胞培养液上清使小鼠HSC-T6细胞的MMP-2、Cav-1、MT1-MMP、TIMP-2蛋白表达减少而MMP-2的活性增高。结论:缺氧条件培养稳定敲低Keap1的肝细胞,肝细胞损伤程度减轻,合成及释放TNF-α减少。肝细胞培养上清液对HSC-T6细胞内吞相关分子Cav-1表达的刺激作用降低,减轻了Cav-1对膜表面的MMP-2活化的干扰,使MMP-2活性得以升高。

• 单位
  东南大学