橡胶树蔗糖转运蛋白基因SOS酵母双杂交体系的诱饵载体构建及自激活检测

作者：秦云霞; 戚继艳; 唐朝荣

来源：热带生物学报, 2010, 1(04): 314-320.

DOI：10.3969/j.issn.1674-7054.2010.04.004

• 巴西橡胶树
• 蔗糖转运蛋白
• 诱饵载体
• SOS恢复系统
• 酵母双杂交系统

为了筛选巴西橡胶树蔗糖转运蛋白(HbSUT)的互作蛋白质,构建了以SOS恢复系统为原理的胞质酵母双杂交系统的6个HbSUT基因的诱饵载体,并进行了自激活检测。通过PCR技术从携带HbSUT基因的质粒中获得预期的基因编码序列,将目标片段定向插入诱饵载体pSOS的SalⅠ及NotⅠ酶切位点之间,酶切和测序结果表明,获得了序列和读框正确的6个HbSUT基因的诱饵载体pSOS-SUTs,进一步导入酵母温度敏感酵母cdc25H菌株中,检测其表达产物对酵母SOS恢复系统Ras信号通路的激活作用,除pSOS-SUT5外,其他5个诱饵载体对酵母菌株均无激活作用,因而适合于进行后续互作蛋白质筛选研究。

• 单位
  中国热带农业科学院橡胶研究所