人心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)的原核表达、纯化和冻干品的制备

作者：武建伟; 才蕾; 任艳娜; 钱伟; 王继华; 唐时幸

来源：中国生物工程杂志, 2014, 34(03): 79-83.

DOI：10.13523/j.cb.20140311

• 心型脂肪酸结合蛋白
• 原核表达
• 冻干品
• 急性心肌梗死

目的:获得重组人心型脂肪酸结合蛋白,分析其活性及制备冻干品。方法:从GenBank中检索人源H-FABP CDs序列,合成基因后构建原核表达载体pET-28a(+)-H-FABP。将表达载体转入E.coli BL21(DE3),摸索pET-28a(+)-H-FABP最佳诱导条件,表达并纯化重组蛋白。使用检测试剂检测纯化后的重组H-FABP活性,研究最佳冻干方案并考察冻干品的稳定性。结果:经过优化诱导条件,重组H-FABP在BL21(DE3)中以可溶性蛋白形式表达。诱导条件为OD600≈0.6,IPTG终浓度0.4mmol/L,30℃诱导4h。通过Ni2+亲和层析纯化可得到纯度大于95%的重组HFABP蛋白。重组H-FABP冻干品可以在37℃稳定保存12d,25℃、4℃稳定保存至少4个月。结论:本项研究中的重组H-FABP表达体系成熟、蛋白活性高,冻干品稳定性好,为后续研究提供了稳定高效的生物原材料。

• 单位
  广州万孚生物技术股份有限公司