硫酸镍对人正常肝细胞存活率及相关凋亡蛋白影响

作者：刘必勇; 赵盼; 王雷; 陈葆春^*

来源：中国职业医学, 2020, 47(05): 548-552.

• 硫酸镍
• 人正常肝细胞
• 细胞凋亡
• PERK信号通路

目的探讨硫酸镍对人正常肝细胞系L02细胞的存活率和凋亡的影响。方法 (1)将对数生长期的L02细胞随机分为9个组,每组6个复孔,分别以浓度为0、100、200、300、400、500、600、700和800μmol/L的硫酸镍染毒0、6、12、24、48、72 h,采用CCK-8法检测L02细胞的存活率,选择后续实验的硫酸镍染毒剂量与染毒时间。(2)将对数生长期的L02细胞随机分为对照组和100、300μmol/L剂量组,分别以浓度为0、100、300μmol/L的硫酸镍染毒12 h,蛋白免疫印迹法检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(BCL-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶(caspase)-3蛋白、BCL-2相关X蛋白(BAX)、磷酸化RNA依赖的蛋白激酶样内质网激酶(p-PERK)、磷酸化真核细胞翻译起始因子2α(p-eIF2α)、CCAAT增强子结合蛋白的同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的蛋白相对表达水平。结果 (1)硫酸镍染毒后,L02细胞的细胞存活率呈现随着染毒时间的延长、染毒剂量的增加而下降的趋势(P值均<0.01);根据硫酸镍对L02细胞的半数抑制浓度,选择后续实验中硫酸镍染毒时间为12 h,染毒剂量为100、300μmol/L。(2)与对照组比较,100、300μmol/L组L02细胞中BCL-2蛋白相对表达水平均降低(P值均<0.05),BAX和caspase-3蛋白相对表达水平、BAX/BCL-2比值均升高(P值均<0.05);与100μmol/L组比较,300μmol/L组L02细胞中BCL-2蛋白相对表达水平降低(P<0.05),BAX和caspase-3蛋白相对表达水平、BAX/BCL-2比值均升高(P值均<0.05)。与对照组比较,100、300μmol/L组L02细胞中p-PERK、p-eIF2α、CHOP和GRP78蛋白的相对表达水平均升高(P值均<0.05);与100μmol/L组比较,300μmol/L组L02细胞中p-eIF2α、CHOP和GRP78蛋白相对表达水平均升高(P值均<0.05)。结论硫酸镍可调控L02细胞凋亡蛋白和PERK信号通路相关蛋白的表达,加剧L02细胞的凋亡,降低L02细胞的细胞存活率。

• 单位
  安徽省第二人民医院