内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响研究

作者：侯孝忠; 徐林飞; 易威威; 陈艳阳; 沈皆亮^*

来源：中国修复重建外科杂志, 2019, 33(06): 736-742.

• 吸烟
• 椎间盘退变
• 细胞凋亡
• 炎性反应
• 内质网应激

目的探讨内质网应激对吸烟诱导的髓核细胞凋亡与炎性反应的影响。方法以2016年10月—2018年10月25例接受椎间盘摘除术的颈椎间盘突出症患者为研究对象,分为吸烟组(14例)和非吸烟组(11例)。两组患者年龄、性别、突出节段、Pfirrmann分级比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。将术中获取的髓核组织,行TUNEL染色和Western blot检测,观察细胞凋亡情况。然后,采用酶序贯消化法分离培养髓核细胞并传代,取第3代细胞行ELISA检测炎性因子IL-1β和TNF-α含量,免疫荧光染色观察细胞中P65核转移情况,Western blot检测内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达,透射电镜观察细胞内质网超微结构。最后,为验证内质网调控作用,采用特异性抑制剂4-PBA处理吸烟组髓核细胞后,Western blot检测GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量,流式细胞术检测细胞凋亡率;并以吸烟组未作处理的髓核细胞作对照。结果髓核组织观测显示,吸烟组细胞凋亡率及凋亡相关蛋白Caspase-3和PARP相对表达量均明显高于非吸烟组(P<0.05)。髓核细胞观测显示,吸烟组髓核细胞分泌IL-1β、TNF-α水平以及GRP78、CHOP蛋白相对表达量均明显高于非吸烟组(P<0.05);免疫荧光染色示吸烟组细胞P65主要表达在细胞核,而非吸烟组在细胞质;透射电镜观察显示,与非吸烟组相比,吸烟组内质网处于应激损伤状态。吸烟组髓核细胞经4-PBA处理后,GRP78、CHOP、IL-1β、TNF-α及P65蛋白相对表达量以及细胞凋亡率均较处理前明显降低(P<0.05)。结论吸烟可通过内质网应激导致髓核细胞凋亡和炎性反应加剧,抑制内质网应激有望成为延缓吸烟导致椎间盘退变的新靶点。

• 单位
  河南省胸科医院; 重庆医科大学附属第一医院