丹酚酸F调控Bax/Caspase-3/GSDME信号通路改善肾小管上皮细胞焦亡作用机制

作者：石贤聪; 谢治深; 赵靓; 王佳俊; 段亚飞; 王潘; 张振强; 张效威^*; 徐江雁^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2023, 1-11.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20232223

• 丹酚酸F
• Bcl-2相关X蛋白(Bax)/半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)/消皮素E (GSDME)信号通路
• 肾小管上皮细胞
• 细胞焦亡

目的：基于Bcl-2相关X蛋白(Bax)/半胱氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)/消皮素E(GSDME)通路探讨丹酚酸F(Sal F)改善高糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)损伤的机制。方法：细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测不同浓度(2.5、5、10、20 μmol·L-1)Sal F对高糖诱导的HK-2细胞相对活力的影响以及给予Sal F不同干预时间条件下HK-2细胞的相对活力；乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒和酶联免疫吸附实验(ELISA)试剂盒分别检测细胞培养基上清中LDH和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量；流式细胞术结合异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)和Hoechst 33342/PI染色检测Sal F对高糖诱导的HK-2细胞PI阳性率的影响；蛋白质印迹法(Western blot)评价Sal F对高糖诱导的HK-2细胞中Bax、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、细胞色素C(Cytochrome C)、半胱氨酸蛋白水解酶9(Caspase-9)、Caspase-3、GSDME蛋白表达以及激活情况的影响。2，7-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针法(DCFH-DA)以及线粒体膜电位试剂盒(JC-1)考察Sal F对高糖诱导的HK-2细胞中活性氧(ROS)产生以及线粒体膜电位的影响。结果：与空白组相比，模型组细胞活力降低(P<0.01)，乳酸脱氢酶、炎症因子IL-1β、PI阳性细胞比例均显著升高(P<0.01)；Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达升高(P<0.01)，Bcl-2蛋白表达降低(P<0.01)，HK-2细胞线粒体膜电位的降低，ROS产生过量蓄积。与模型组相比，Sal F有效改善高糖诱导所致HK-2细胞的损伤(P<0.05)，降低细胞培养基上清中LDH及IL-1β的含量(P<0.05，P<0.01)，减少PI阳性细胞的比例(P<0.01)；Sal F降低Bax、Cytochrome C、Caspase-9、Caspase-3、GSDME蛋白表达，升高Bcl-2蛋白表达(P<0.05，P<0.01)，HK-2细胞线粒体膜电位的升高，ROS的过量蓄积减少。结论：Sal F通过减少ROS的产生，改善线粒体膜电位失衡，抑制Bax/Caspase-3/GSDME信号通路介导的细胞焦亡发挥改善高糖诱导所致HK-2细胞损伤的作用。

• 单位
  河南中医药大学