抗GPC3/NKG2D双特异性融合蛋白的制备及其功能研究

作者：刘蕴慧; 葛晨; 徐勤枝; 钱尼良; 杨慧; 万令飞; 阎新龙^*; 高新^*

来源：中国新药杂志, 2021, 30(21): 1975-1981.

• 双特异性融合蛋白
• 双特异性抗体
• 肝细胞肝癌
• 磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3
• NKG2D

目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)和NKG2D的双特异性融合蛋白,并初步评价其在体外对肝癌细胞的杀伤功能。方法:通过基因工程技术,将NKG2D的配体人主要组织相容性复合物Ⅰ类相关蛋白A(MHC classⅠchain-related A,MICA)胞外区融合到Fab形式的抗人GPC3抗体GC33的重链末端,构建双特异性融合蛋白(Fab GC33-MICA,FabGM)表达载体;转染FreeStyleTM 293-F细胞,收集细胞培养上清,经亲和纯化获得FabGM蛋白;利用分子相互作用技术(Fortebio)和流式细胞术检测FabGM的靶向亲和力;细胞实时动态成像分析系统测定FabGM介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对高表达GPC3的人肝癌细胞HepG2的杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBMCs分泌人干扰素-γ(hIFN-γ)情况。结果:本研究成功地表达并纯化了FabGM,明确FabGM可特异性结合GPC3和NKG2D。经检测FabGM能有效介导PBMCs靶向杀伤HepG2肝癌细胞,诱导PBMCs分泌IFN-γ。结论:双特异性融合蛋白FabGM能够在体外有效介导效应细胞PBMCs杀伤肝癌细胞HepG2,为FabGM成为肝细胞肝癌的潜在靶向治疗药物提供了实验依据。

• 单位
  北京工业大学