联合应用泛素分子基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定

作者：张亮; 于澜; 叶伟; 李璞媛; 张芳琳; 程林峰

来源：传染病信息, 2015, 28(02): 83-87.

• 汉坦病毒
• 腺病毒科
• 泛素

目的构建含有泛素(ubiquitin,Ub)基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得Ub基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体p Shuttle-p CAG-Gn S0.7和p Shuttle-p CAG-Gc S0.7中,进一步通过双酶切将转移载体中的嵌合基因分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体r Ad-p CAG-Ub-Gn S0.7和r Adp CAG-Ub-Gc S0.7,使用PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测表达产物。结果限制性内切酶酶切鉴定、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。IFA检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含有Ub基因的汉滩病毒嵌合基因Gn S0.7和Gc S0.7重组腺病毒,为进一步研究联合Ub基因的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。