奶牛乳腺上皮细胞模型的建立与鉴定

作者：卢金霞; 何芳; 刘丛玲; 周学章; 刘军红

来源：黑龙江畜牧兽医, 2017, (09): 30-292.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.0761

• 奶牛
• 乳腺上皮细胞
• 细胞培养
• 组织块培养法
• 乳汁分离法
• 凋亡率

为了建立奶牛乳腺上皮细胞模型,并对建立的细胞模型生物学特性进行鉴定,试验采用组织块培养法和乳汁分离法分离培养奶牛乳腺上皮细胞,利用差时胰酶消化法纯化奶牛乳腺上皮细胞,通过测定生长曲线、细胞群体倍增时间、核型、奶牛乳腺上皮细胞骨架蛋白-角蛋白等对所培养细胞进行鉴定,以确定其为奶牛乳腺上皮细胞,并用金黄色葡萄球菌侵染奶牛乳腺上皮细胞,用流式细胞仪(Annexin V/PI双染法)检测奶牛乳腺上皮细胞的凋亡率和坏死率。结果表明:显微镜下观察可见纯化的乳腺上皮细胞为典型上皮细胞形态,呈多角形或乳滴形。细胞生长曲线呈"S"形;细胞群体倍增时间最短为36.6 h;细胞核型正常(2 n=60,XX);细胞特异性蛋白-角蛋白表达呈阳性,金黄色葡萄球菌感染奶牛乳腺上皮细胞3 h,Annexin V/PI双染法检测发现感染组细胞凋亡率和坏死率均明显升高,差异极显著(P<0.01)。说明试验成功建立了奶牛乳腺上皮细胞模型。

• 单位
  宁夏大学新华学院; 宁夏大学