野生型烟草NtLBM1基因的克隆与原核表达纯化

作者：黎忠杰; 陶怡; 黄璐; 杨洁; 吴拥军^*

来源：分子植物育种, 2022, 20(02): 414-421.

DOI：10.13271/j.mpb.020.000414

• NtLBM1
• 原核表达
• 蛋白纯化

为了获得一定纯度的Nt LBM1蛋白，本研究通过RT-PCR从野生型烟草叶片中扩增得到NtLBM1cDNA序列。生物信息学分析表明，NtLBM1全长1 459 bp，开放阅读框为846 bp，编码281个氨基酸，含1个SANT保守结构域；构建pET30a-NtLBM1原核表达载体，并转化到E. coli BL21 (DE3)中，NtLBM1蛋白以包涵体形式存在，包涵体蛋白经8 mol/L尿素溶解后，采用Q Sepharose FF离子交换层析和Ni-IDA亲和层析洗脱纯化，4℃透析后置于2 mol/L尿素缓冲液中复性，最终获得浓度为0.390 mg/mL、纯度90%以上的Nt LBM1蛋白。目的蛋白的成功表达为进一步研究NtLBM1蛋白的互作及其对植物生长发育的调控机制提供了理论参考和数据支持。

• 单位
  生命科学学院; 贵州大学