利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因定点突变的大鼠模型

作者：李晨浩; 车凤玉; 王国霞; 杨行; 李辉; 张勇^*; 杨颖^*

来源：神经解剖学杂志, 2018, 34(06): 737-741.

DOI：10.16557/j.cnki.1000-7547.2018.06.015

• CRISPR/Cas9
• FARS2
• sgRNA
• 遗传性痉挛性截瘫
• 基因敲除大鼠

目的:利用CRISPR/Cas9技术构建FARS2基因特定位点突变的大鼠模型。方法:根据FARS2基因序列,设计FARS2基因特异性的单链向导RNA(sgRNA)引物序列并克隆入p U57-T7-GDNA载体。利用T7 RNA聚合酶体外转录sgRNA和Cas9 mRNA。将体外转录的sgRNA/Cas9 mRNA显微注射入SD大鼠受精卵,通过PCR和基因测序对FARS2基因特定位点突变进行检测和鉴定。繁育FARS2基因敲除大鼠并分析后代突变情况。结果:基因测序证实成功构建表达sgRNA载体,成功将sgRNA和Cas9 mRNA直接注射入大鼠受精卵。基因测序鉴定获得5只F0代初建鼠。DNA测序结果证实5号大鼠(ID#5)发生了gac> tac突变,该突变并可遗传至子代大鼠。结论:利用CRISPR/Cas9技术成功制备FARS2基因定点突变的大鼠模型,为进一步研究FARS2的功能奠定了基础。

• 单位
  基础医学院; 西安市儿童医院; 中国人民解放军空军军医大学