摘要
目的探讨hsa-miR-199a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-miR-199a-5p基因的慢病毒载体(hsa-miR-199a-5p组)及空白慢病毒载体(rLv-NC组)感染KFs, 并设空白对照组(KFs正常培养)。采用CCK-8法检测各组KFs的增殖情况。慢病毒感染KFs 48 h后, 应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组KFs的hsa-miR-199a-5p表达水平, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况, Transwell实验检测细胞侵袭能力, 并分别采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad3及TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染KFs 48 h后, hsa-miR-199a-5p组的hsa-miR-199a-5p表达量明显高于rLv-NC组和空白对照组, 差异有统计学意义(P<0.01);与rLv-NC组和空白对照组相比, hsa-miR-199a-5p组的细胞增殖率、侵袭性均有所降低, 细胞凋亡率有所升高, 差异有统计学意义(P<0.01);hsa-miR-199a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Smad3、TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于rLv-NC组和空白对照组, 差异有统计学意义(P<0.01)。结论 hsa-miR-199a-5p可能通过抑制TGF-β/Smad通路的表达, 抑制KFs增殖与侵袭, 并促进KFs凋亡, 从而抑制瘢痕疙瘩纤维化。
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单位广东医科大学附属医院; 柳州市工人医院