RNA干扰技术抑制类风湿关节炎成纤维细胞COX-2合成

作者：姜林娣; 王汉洲; 郭津生; 赵凤娣; 薛如意; 王吉耀

来源：复旦学报(医学版), 2007, (02): 302-306+312.

DOI：10.3969/j.issn.1672-8467.2007.02.033

• 关节炎
• 类风湿
• 环氧化酶
• 前列腺素E2
• RNA干扰
• 成纤维细胞

目的体外合成针对人环氧化酶-2(hCOX-2)的小分子干扰RNA(siRNA),并转染入人滑膜成纤维细胞,通过比较不同siRNA抑制COX-2 mRNA表达、COX-2蛋白合成以及下游产物PGE2水平,旨在确定特异性阻断人滑膜成纤维细胞COX-2的siRNA。方法分离、培养和传代人类风湿关节炎(类风关)滑膜成纤维细胞。设计合成4条针对hCOX-2 mRNA siRNA(1#-4#siRNA),1条随机序列siRNA。设立1#-4#siRNA和随机序列siRNA组(NC)及未转染对照组(CTL组)。应用Lipofect AMINE2000将上述siRNA分别转染人滑膜成纤维细胞,4h后各培养孔加入终浓度为100nmol/L的佛波酯。转染36h、48h后,各组提取蛋白质和总RNA,应用RT-PCR检测hCOX-2 mRNA表达水平,通过Western Blot检测hCOX-2蛋白表达水平。采用ELISA方法检测各组上清液PGE2的水平。结果转染36h,PCR结果显示,CTL、NC、1#siRNA、2#RNA、3#RNA、4#siRNA、阳性对照HeLa细胞组hCOX-2 mRNA电泳条带密度值分别为1、0.72、0.3、0.25、0.4、0.04、2.1。WesternBlot结果提示上述各组hCOX-2蛋白密度值分别为1、1.04、0.52、0.39、0.9、0和2.48。转染48h后,各组hCOX-2蛋白条带密度值分别为0.05、0.52、0.51、0.9和0.15。转染24h、48h和72h后,4#siRNA组培养上清液PGE2的水平较其他各组低。结论4#siRNA能有效抑制人滑膜成纤维细胞COX-2 mRNA表达和COX-2蛋白的合成,且上清液中PGE2水平最低,证实4#siRNA能特异性阻断COX-2在滑膜成纤维细胞表达。

• 单位
  复旦大学附属中山医院; 复旦大学