慢病毒介导C-1-1基因维持“自组装”工程化软骨永久性表型的研究

作者：孙志博; 杨述华; 张宇坤; 张波

来源：中华实验外科杂志, 2012, (04): 726-728.

• 软骨
• 基因转染
• 生长分化因子-5

目的观察慢病毒介导C-1-1基因对维持"自组装"工程化软骨永久性表型的影响。方法构建携带C-1-1基因的重组慢病毒表达载体并转染成人骨髓间充质干细胞(hMSCs),用嘌呤霉素筛选获得阳性细胞。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹试验(Western blot)观察C-1-1基因的表达效果。用含有生长分化因子-5(GDF-5)的成软骨培养基诱导培养3周,3周后重悬细胞,以5×10~9个/L的细胞终质量浓度接种于2%琼脂糖包被的24孔板,行自组装培养3周后取材。通过Ⅱ型、Ⅹ型胶原免疫组织化学,甲苯胺蓝染色鉴定分化结果 ,并与空载体转染组和未转染组比较。结果测序证实成功构建携带C-1-1基因的重组慢病毒表达载体,转染hMSCs后,C-1-1基因在转录水平和翻译水平都有明显表达。自组装培养3周后,3组标本经甲苯胺蓝染色均可见广泛蓝染并带有异染型着色。C-1-1基因转染组的Ⅱ型胶原平均吸光度(A)值为(0.3754±0.0255),与空载体转染组和未转染组比较,差异无统计学意义(P>0.05);X型胶原平均A值为(0.0115±0.0062),显著低于空载体转染组和未转染组(P<0.01)。结论慢病毒介导C-1-1基因转染后,可增强"自组装"工程化软骨表型的稳定性,抑制其成熟肥大。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属协和医院