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摘要
目的：构建敲减人雄激素受体（AR）基因的慢病毒质粒，转染Hep3B细胞使其表达目的蛋白并探索其对PTEN、p-AKT蛋白表达的影响。方法：设计合成3对针对AR基因特异性敲减的寡核苷酸片段，分别连接于重组慢病毒载体pLKO.1，构建3条AR干扰载体。利用验证正确的3个慢病毒载体转染293T细胞得到慢病毒上清液。采用RT-PCR和Western blot在5株肝癌细胞中挑选AR高表达的细胞系进行AR慢病毒上清液感染。RT-PCR和Western blot检测3条AR干扰质粒在Hep3B细胞内的表达及其对PTEN、p-AKT蛋白表达的作用。结果：测序鉴定证实3条AR慢病毒干扰载体构建成功，干扰Hep3B细胞后，RT-PCR和Western blot结果显示其中1条AR干扰后的mRNA和蛋白表达明显降低，细胞内PTEN蛋白表达升高，p-AKT表达降低。结论：成功构建3条AR干扰载体，其中1条干扰效率较高，能在Hep3B细胞中干扰AR的表达，感染细胞后上调抑癌基因PTEN的蛋白表达对p-AKT有抑制作用，提示AR和PTEN/AKT信号通路可能具有相关性。
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单位厦门医学院
