穿心莲内酯对TBHP诱导的椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制研究

作者：范明宇; 卞峰; 周少怀; 王欣; 汪平; 李静; 黄娅芬; 李嘉琼

来源：重庆医科大学学报, 2023, 48(07): 777-783.

DOI：10.13406/j.cnki.cyxb.003282

• 穿心莲内酯
• 髓核细胞
• 椎间盘退变
• 细胞凋亡
• 线粒体氧化应激

目的：探讨穿心莲内酯（andrographolide,ANDRO）对叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,TBHP）诱导的椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPC）凋亡的作用及其机制。方法：用TBHP诱导NPC建立细胞模型。将NPC分为5组：对照组、模型组（100μmol/L TBHP）、ANDRO低剂量组（100μmol/L TBHP+9μmol/L ANDRO）、ANDRO中剂量组（100μmol/L TBHP+18μmol/L ANDRO）和ANDRO高剂量组（100μmol/L TBHP+36μmol/L ANDRO）。流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平，ELISA试剂盒检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平，JC-1探针法检测线粒体膜电位，Western blot检测动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、p-Drp1和线粒体融合蛋白2(mitofusin 2,Mfn2)的表达水平。结果：与对照组相比，模型组NPC凋亡率、ROS水平和线粒体膜电位下降细胞比例明显升高（均P=0.000）,SOD、GSH-PX和CAT水平明显降低（均P=0.000）,p-Drp1/Drp1水平明显上调（P=0.000）,Mfn2蛋白表达明显下调（P=0.000）。与模型组相比，经ANDRO高剂量干预后，NPC凋亡率[（41.37±0.84）%vs.(26.36±1.33)%]、ROS水平[（42.62±0.71）%vs.(22.50±0.37)%]和线粒体膜电位下降细胞比例[（43.85±0.71）%vs.(24.96±1.04)%]明显降低（均P=0.000）,SOD[(288.16±14.59) ng/mL vs.(658.87±13.22) ng/mL]、GSH-PX[(6.66±0.37) ng/mL vs.(15.66±0.56) ng/mL]和CAT[(40.89±1.04) pg/mL vs.(87.91±1.56) pg/mL]水平明显升高（均P=0.000）,p-Drp1/Drp1水平（0.96±0.05 vs. 0.63±0.01）明显下调（P=0.001、0.000）,Mfn2蛋白表达（0.39±0.01 vs. 0.64±0.02）明显上调（均P=0.000）。结论：ANDRO具有抑制TBHP诱导的NPC细胞凋亡的作用，其机制可能与调节线粒体功能，缓解氧化应激有关。

• 单位
  武汉市第三医院