电转方法用于modRNA转染细胞的初步研究

作者：陈茂林; 王会景; 艾雪峰; 颜冰倩; 宫艺奇; 谭瑶; 付炜^*; 王伟^*

来源：组织工程与重建外科, 2019, 15(04): 215-221.

• 合成修饰的信使核糖核酸
• 电转法
• 最适电压
• 最适脉冲时间

目的探讨电转方法用于modRNA转染细胞的可行性,并筛选出不同细胞电转所需的最适电压和脉冲时间。方法 (1)筛选电转EGFP modRNA进入人成纤维细胞的最佳电压和脉冲时间参数;(2)在此基础上将人成纤维细胞转染n GFP/EGFP+mCherry modRNA;(3)将Hela、293T、3T3三种常见贴壁细胞电转EGFP modRNA。结果 (1)人成纤维细胞电转modRNA的最适电压为440 V,最适脉冲时间为30 ms;(2)nGFP可在核内表达,EGFP和mCherry两种蛋白可同时在胞质中表达;(3)Hela、293T、3T3细胞电转最适电压分别为425 V、400 V和440 V,最适脉冲时间均为30 ms。结论本实验证明(1)电转法转染modRNA进入细胞质和细胞核的可行性;(2)可同时将两种modRNA导入同一个细胞内并表达;(3)最适电压和最适脉冲时间需根据不同的细胞种类分别筛选。

• 单位
  上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心