响应面法优化龟甲蛋白提取工艺及其对MC3T3-E1细胞增殖活性

作者：李晶峰; 郅慧; 杨小倩; 高旭; 张辉^*; 孙佳明^*

来源：食品工业科技, 2021, 42(02): 302-309.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2020030281

• 龟甲蛋白
• 响应面优化
• 成骨细胞
• 活性组分

目的:优化龟甲蛋白提取工艺,筛选龟甲促成骨细胞(MC3T3-E1)增殖活性组分。方法:以蛋白含量及对MC3T3-E1细胞增殖率为指标筛选龟甲蛋白提取方法;以料液比、提取温度、时间为自变量,龟甲蛋白含量为因变量,进行单因素提取研究,结合响应面试验设计,获得提取龟甲蛋白最佳工艺;通过超滤技术将龟甲蛋白按分子量分为5个不同组分:总提组分(组分1),Mw>10 kDa组分(组分2),Mw:3～10 kDa组分(组分3),Mw:1～3 kDa组分(组分4),Mw<1 kDa组分(组分5),CCK8法测定不同浓度龟甲蛋白(12.5、25、50、100、200μg/mL)及其不同组分对MC3T3-E1细胞增殖率的影响。结果:磁力搅拌方法得到的龟甲蛋白含量最高,且活性最佳,龟甲蛋白最佳提取条件为料液比1∶13 (g/mL)、提取温度30℃、提取3 h,此条件下测得龟甲蛋白含量为15.16%;龟甲蛋白不同组分均能促进MC3T3-E1前成骨样细胞增殖,并呈浓度依赖性,在浓度为200μg/mL时,组分1～5对细胞的增殖率分别为20.58%、25.30%、30.24%、37.89%、38.15%,分子量小于1 kDa的组分促MC3T3-E1细胞增殖活性最佳。结论:本研究为龟甲蛋白的制备工艺提供参考,并证明龟甲蛋白及其不同组分均具有较好的促成骨细胞增殖活性,其中分子量小于1 kDa组分对MC3T3-E1细胞增殖的效果最佳。

• 单位
  长春中医药大学