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摘要
血管紧张素转化酶(ACE)是一种含锌离子的羧二肽酶，通过肾素-血管紧张素系统和激肽释放酶-激肽系统进行血压调节。食源血管紧张素转化酶抑制肽(ACEIP)可抑制ACE的活性对高血压控制有利。以鲣鱼蛋白分离出的ACE抑制肽Leu-Lys-Pro(LKP)为原料，采用荧光光谱法、紫外-可见光谱法、圆二色谱法、等温滴定量热法(ITC)以及分子对接技术研究了LKP对ACE的抑制机理。荧光光谱结果表明，LKP能够有效猝灭ACE的内源荧光，猝灭机制为静态猝灭，两者结合可形成较稳定的复合物，ACE中色氨酸和酪氨酸残基所处的微环境疏水性减小，导致极性增强。紫外、圆二色谱结果表明，LKP与ACE结合会导致ACE构象发生改变，ACE与LKP结合后二级结构比未结合时松散，为紧密-松散-稍紧密的变化过程。ITC测得LKP与ACE结合的焓变(ΔH)、熵变(ΔS)、化学计量比(n)以及结合常数(Ka)等热力学参数，结果表明两者结合反应是由熵驱动的自发吸热过程，结合力主要为疏水作用，确定LKP与ACE相互作用的结合位点数约为1,且随温度升高而增加。LKP与ACE的结合常数Ka分别为2.2×103, 0.9×103和5.3×103,说明两者亲和力较小。分子对接结果表明，ACE活性中心的S1口袋的氨基酸残基Gln281, Lys511与LKP形成氢键相互作用，His353, His513与LKP具有疏水作用，LKP主要通过疏水作用与ACE结合，氢键稳定蛋白空间结构。该研究对了解ACE抑制肽与ACE的作用机制提供了一定的帮助，为开发新的治疗高血压药物建立一定的理论基础。
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