人内皮抑素重组腺病毒的构建及鉴定

作者：闫乃红; 陈清英; 曹桂群; 王玲; 张发强; 夏庆杰

来源：华西医学, 2005, (04): 19-20.

• 内皮抑素
• 腺病毒
• 转染
• 293细胞

目的:利用Adeasy1系统,构建并鉴定人内皮抑素(hES)重组腺病毒。方法:从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES中将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrackCMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体。线形化后转染293细胞进行包装扩增,利用AdEasy系统上的绿色荧光蛋白鉴定病毒表达。结果:重组腺病毒载体经PCR鉴定正确,病毒滴度为1×108PFU/ml。结论:成功构建了人内皮抑素重组腺病毒Ad-ASP-hES,为内皮抑素基因治疗新生血管的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  四川大学华西医院