αA-晶体蛋白在2型糖尿病大鼠神经视网膜的异常表达

作者：张民英; 吴晓燕; 王亚冬; 刘庆准

来源：中华眼底病杂志, 2010, 26(2): 160-164.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2010.02.16

• 糖尿病视网膜病变/病理生理学
• α晶体蛋白质类/分析
• 糖尿病
• 实验性

目的 用蛋白质组学方法观察αA-晶体蛋白在早期2型糖尿病大鼠神经视网膜的异常表达.方法 28只成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为正常对照组和糖尿病组.每组14只.糖尿病组大鼠采用高脂饮食饲养联合小剂量链脲佐菌素(STZ)注射诱导2型糖尿病模型(T2DM),以随机血糖持续高于16.7 mmol/L为模型建立成功标准.对照组用常规饲料喂养.腹腔注射相同剂量枸橼酸钠缓冲液.成模56 d后断颈处死所有大鼠,剥离留存神经视网膜组织.从对照组和糖尿病组各取3只大鼠的神经视网膜组织,提取总蛋白,用二维凝胶电泳(2-DE)方法分别进行分离.应用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)和肽质量指纹图谱(PMF)技术对部分差异表达蛋白进行鉴定,并用蛋白免疫印迹(Western blot)和间接免疫荧光(IMF)方法对在糖尿病组表达上调的αA-晶体蛋白进行验证.结果 平均每块凝胶检测到的蛋白斑点,对照组为(3122±37),糖尿病组为(2702±21)个.二者比较,表达水平差异有统计学意义的斑点约150个(t值均>2.57,P值均<0.05).在糖尿病组表达上调68个,表达下调82个.质谱分析和数据库检索鉴定出20个差异表达蛋白斑点.其中二维凝胶中2369和1048斑点在糖尿病组呈现高表达.经质谱PMF鉴定为αA-晶体蛋白.Western blot检测结果显示,αA-晶体蛋白在糖尿病组大鼠神经视网膜表达明显增高.IMF结果显示αA-晶体蛋白在糖尿病组高表达,阳性表达主要位于视网膜的内外核层,在细胞的核周细胞浆区域有强荧光聚集.结论 αA-晶体蛋白在早期2型糖尿病大鼠神经视网膜表达增高.

• 单位
  基础医学院; 南京医科大学第一附属医院; 南京医科大学